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臺(tái)式大容量離心機(jī)的分離條件如何有效確定?

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   臺(tái)式大容量離心機(jī)的分離技術(shù)是根據(jù)顆粒在一個(gè)實(shí)用離心場合中的狀態(tài)而發(fā)展起來的新技術(shù)。不同密度、大小或形狀的顆粒在不同的離心場合中沉降,所以一個(gè)大體是球形非均一的混合物,可以用離心的方法加以分離,應(yīng)用離心機(jī)是為了進(jìn)一步研究生物化學(xué)分離大量的物質(zhì)。例如收集細(xì)胞,分離血漿,從這些預(yù)純化的制劑中分離DNA和蛋白質(zhì)分子,并可分離出病毒以及大規(guī)模大腸桿菌,嚴(yán)細(xì)胞成分,核蛋白微粒等。
  臺(tái)式大容量離心機(jī)在生物行業(yè)主要用于各種生物樣品的分離、純化和制備:
  1.低速離心機(jī)主要用于細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞膜的沉淀和收集等;
  2.高速離心機(jī)主要用于制備和收集微生物、細(xì)胞碎片、大的細(xì)胞器等;
  3.超高速離心機(jī)主要用于分離、提純、鑒定和分析線粒體、微粒體、染色體、溶酶體、質(zhì)粒、大分子核酸、高分子蛋白質(zhì)等。
  臺(tái)式大容量離心機(jī)的分離條件確定無外乎這幾點(diǎn):
  1.轉(zhuǎn)速
  離心力大小取決于轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)速和離心半徑。在說明離心條件時(shí),低速離心通常以轉(zhuǎn)子每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)(rpm)表示。在高速離心,特別是超高速離心時(shí),往往用相對(duì)離心力(RCF)表示。實(shí)際工作中,離心力通常指相對(duì)離心力的平均值,即離心管中點(diǎn)的離心力。
  2.分離時(shí)間
  分離時(shí)間因離心方法不同而有差別:對(duì)于差速離心,分離時(shí)間是指顆粒*沉降到離心管底的時(shí)間;對(duì)于速率區(qū)帶離心,分離時(shí)間是指形成界限分明的區(qū)帶的時(shí)間;對(duì)于等密度區(qū)帶離心,分離時(shí)間是指顆粒*到達(dá)等密度點(diǎn)的平衡時(shí)間;對(duì)于速率區(qū)帶離心所需的區(qū)帶形成時(shí)間和等密度區(qū)帶離心所需的平衡時(shí)間,影響因素很復(fù)雜,可通過試驗(yàn)確定。
  3.分離溫度
  為防止分離物質(zhì)的凝集、變性和失活,除了注意離心介質(zhì)的選擇外,還必須控制好分離溫度,分離溫度一般控制在4℃左右。對(duì)于熱穩(wěn)定性較好的物質(zhì),可在室溫下進(jìn)行離心分離。在高速離心或超高速離心時(shí),轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)會(huì)發(fā)熱從而引起溫度升高,必須采用冷凍系統(tǒng),使溫度保持在一定范圍內(nèi)。
  4.介質(zhì)溶液PH值
  離心介質(zhì)溶液PH值應(yīng)該處于分離物質(zhì)穩(wěn)定的PH范圍內(nèi),必要時(shí)可采用緩沖液。另外,過酸、過堿可能引起轉(zhuǎn)子和離心機(jī)其它部件的腐蝕,應(yīng)盡量避免。
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